Resultado da pesquisa (18)
Termo utilizado na pesquisa detecção molecular
#1 - Occurrence of Salmonella spp. in fecal samples from foals with and without diarrhea in the state of São Paulo: microbiological diagnosis, antimicrobial susceptibility profile, and molecular detection
Abstract in English:
The present study investigated Salmonella spp. in the feces of 200 foals up to one year of age (100 with clinical signs of diarrhea and 100 without clinical signs of diarrhea). Bacteriological culture, serotyping, antimicrobial susceptibility, and real-time PCR (qPCR SYBR® Green or a TaqMan®) for detecting the invA gene (with and without a selective pre-enrichment step in tetrathionate broth) were performed. Bacterial culture revealed 15% (n=30) of positive animals (21 animals with diarrhea and nine without diarrhea). Among the 30 isolates, 13 different serovars were identified: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multidrug resistance was found in 43.33% (n=13) of the isolates, with one isolate obtained from animals without diarrhea and 12 isolates from animals with diarrhea. All qPCR techniques used in the study classified more samples as positive for Salmonella spp. than the bacterial culture of feces. In addition, all qPCR techniques detected more positive animals in the diarrhea group than in the diarrhea-free group. The results confirm the utility of the qPCR method without the pre-enrichment step in tetrathionate as a rapid test for Salmonella spp. in carrier animals. In animals with clinical signs of diarrhea, it can be combined with bacterial culture (antimicrobial susceptibility testing and serotyping). The isolation of Salmonella spp. in nine animals without diarrhea confirms the importance of asymptomatic carrier animals in the epidemiology of the disease. The multidrug resistance observed highlights the importance of rational antimicrobial use in horses and adopting biosecurity protocols that are efficacious in controlling the spread of infections between animals and zoonotic transmission in farms.
Abstract in Portuguese:
O presente estudo investigou a ocorrência de Salmonella spp. em fezes de 200 potros com até um ano de idade (100 com sinais clínicos de diarreia e 100 sem sinais clínicos de diarreia), utilizando as técnicas de cultivo bacteriológico e PCR em tempo real (qPCR) pelos métodos de corante fluorescente (SYBR® Green) e sonda específica (Taqman®) para a detecção do gene invA com e sem etapa de pré-enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato. O cultivo bacteriológico revelou 15% (n=30) de animais positivos (21 animais com diarreia e nove animais sem diarreia). Dentre esses 30 isolados, 13 sorovares diferentes foram identificados: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multirresistência foi constatada em 43,33% (n=13) dos isolados, sendo um isolado obtido de animal sem diarreia e 12 isolados de animais com diarreia. Todas as técnicas de qPCR empregadas no estudo apresentaram maior número de amostras classificadas como positivas para Salmonella spp. comparadas ao cultivo bacteriológico de fezes. Adicionalmente, em todas as técnicas de qPCR houve maior número de animais detectados como positivos no grupo de animais com diarreia em relação aos animais sem diarreia. Os resultados confirmaram a utilidade do método qPCR sem a etapa de pré-enriquecimento em tetrationato, como um teste rápido para detecção de Salmonella spp. em animais portadores ou em animais com sinais clínicos de diarreia. O cultivo bacteriológico deve ser associado para a realização do teste de sensibilidade aos antimicrobianos e sorotipificação. O isolamento de Salmonella spp. em nove animais sem diarreia, confirma a importância dos animais portadores assintomáticos na epidemiologia da doença. A multirresistência observada evidencia a importância do uso racional de antimicrobianos em equinos e a importância da adoção de protocolos de biossegurança que sejam eficazes para controlar a disseminação de infecções entre animais e a transmissão zoonótica nas fazendas.
#2 - Molecular detection and phylogenetic analysis of Trypanosoma spp. in Neotropical primates from Rio de Janeiro State, Brazil
Abstract in English:
Trypanosoma spp. infection is a problem in many tropical countries, infecting several animal species, including humans. The aim of the present study was to identify the Trypanosoma species in Neotropical primates from Rio de Janeiro state and compare the results with other reports both phylogenetically and geographically. Molecular detection was based on the 18 SSU gene. The sequences obtained in the PCR were sequenced and compared with others previously deposited in GenBank. These sequences were used to perform phylogenetic analysis and make a distribution map of primate species infected by Trypanosoma species in Brazil. Among 34 monkeys, five capuchin monkeys (Sapajus spp.) and one marmoset (Callithrix spp.) showed Trypanosoma spp. sequences in the same clade of Trypanosoma minasense and three capuchin monkeys’ sequences were in the same clade of Trypanosoma cruzi. The Atlantic Forest and the Brazilian Amazon are the regions with the highest frequency of studies about Trypanosoma spp. and variety of Neotropical primate hosts. These are areas that deserve attention regarding the conservation of biodiversity, but it also makes evident the lack of studies with Neotropical primates in other regions of the country, as well as multidisciplinary studies to better understand the host pathogen relationships.
Abstract in Portuguese:
A infecção por Trypanosoma spp. é um problema em muitos países tropicais, infectando várias espécies animais, incluindo humanos. O objetivo do presente estudo foi identificar as espécies de Trypanosoma em primatas neotropicais no estado Rio de Janeiro e comparar os resultados com outros relatos, tanto filogeneticamente quando geograficamente. A detecção molecular foi baseada no gene SSU 18. As sequências obtidas na PCR foram sequenciadas e comparadas com outras previamente depositadas no GenBank. Essas sequências foram utilizadas para análises filogenéticas e confeccionar um mapa de distribuição de espécies de primatas infectadas por espécies de Trypanosoma no Brasil. Entre 34 macacos, cinco macacos-prego (Sapajus spp.) e um sagui (Callithrix spp.) apresentaram sequências de Trypanosoma spp. no mesmo clado de Trypanosoma minasense e três sequências de macacos-prego estavam no mesmo clado de Trypanosoma cruzi. A Mata Atlântica e a Amazônia brasileira são as regiões com maior frequência de estudos sobre Trypanosoma spp. e variedade de primatas neotropicais hospedeiros. São áreas que merecem atenção no que se refere à conservação da biodiversidade, mas também evidencia a carência de estudos com PNH em outras regiões do país e de estudos multidisciplinares para melhor compreender as relações do patógeno hospedeiro.
#3 - Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans
Abstract in English:
The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neospora spp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.
Abstract in Portuguese:
O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.
#4 - Molecular detection of visceral leishmaniasis in dogs from Barão de Melgaço, Pantanal region of Mato Grosso, Brazil
Abstract in English:
The increasing expansion of visceral leishmaniasis (VL) in the Brazilian territory evidences the need for studies focused on the main reservoir of this parasite: the dog. This study aimed to conduct an epidemiological survey in the municipality of Barão de Melgaço, Pantanal region of the state of Mato Grosso (MT), Brazil. Conventional polymerase chain reaction (PCR) and qualitative SYBR®Green real-time PCR (qPCR) were used to diagnose canine VL (CVL) and characterize the factors associated with this infection. Of the 402 dogs that had blood samples collected, 31 presented the parasite DNA, representing a prevalence of 7.71% in the population studied. Positivity indices for PCR and qPCR were 3.48 (14/402) and 7.21% (29/402), respectively. Comparison of the results obtained by both techniques showed moderate agreement (Kappa = 0.5364). Of the independent variables analyzed, presence of clinical signs (p≤0.05) was the only one associated with CVL. Based on this study, we conclude that VL is a circulating disease, with relatively low prevalence, in dogs of Barão de Melgaço/MT, and that the presence of clinical signs is the only variable associated with canine infection.
Abstract in Portuguese:
A crescente expansão da leishmaniose visceral (LV) no território brasileiro evidencia a necessidade de estudos voltados ao principal reservatório doméstico do parasito: o cão. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi realizar um inquérito epidemiológico no município de Barão de Melgaço, região do Pantanal Mato-grossense, utilizando as técnicas de reação em cadeia pela polimerase convencional (PCR) e teste qualitativo SYBR®Green real-time PCR (qPCR) para o diagnóstico da LV canina (LVC), além de caracterizar os fatores associados a infecção. Do total de 402 cães que tiveram amostras sanguíneas coletadas, 31 apresentaram o DNA do parasito, perfazendo uma prevalência de 7,71% na população estudada. Os índices de positividade para a PCR e qPCR foram de 3,48% (14/402) e 7,21% (29/402), respectivamente. A comparação dos resultados obtidos por ambas técnicas apresentou moderada concordância (Kappa = 0,5364). Das variáveis independentes analisadas, a presença de sinais clínicos (p≤0,05) foi a única associada a ocorrência de LVC. Com base neste estudo, concluímos que a LV está circulando, com prevalência relativamente baixa, em cães de Barão de Melgaço/MT, sendo a presença de sinais clínicos a única variável associada à infecção canina.
#5 - DNA extraction methods for molecular detection of Eimeria spp. in cattle and sheep
Abstract in English:
Molecular detection of Eimeria species in fecal samples can be useful for experimental and diagnostic purposes. However, the parasite quantity presence in feces and the oocyst wall are an obstacle in DNA extraction protocols. Therefore, adequate sampling and effective disruption of the oocysts are essential to improve the accuracy of DNA detection by PCR. The aims of this study were to evaluate the suitability of six protocols for DNA extraction from Eimeria spp. present in bovine and sheep. Twenty pools of fecal samples from cattle (10 pools) and sheep (10 pools) were distributed to six DNA extraction protocols: commercial kit, commercial kit with modification, DNAzol, cetyl-trimethyl ammonium bromide (CTAB), glass beads and commercial kit for fecal samples. Fecal samples were submitted to DNA extraction and PCR. Among the protocols tested, CTAB was determined to be most suitable for DNA extraction from oocysts (90% of DNA detection by PCR); DNAzol and CTAB resulted in higher DNA detection from bovine samples (80%). CTAB and commercial kit with modification improved PCR detection of Eimeria spp. in sheep samples, with positive amplification of DNA in all tested samples.
Abstract in Portuguese:
A detecção molecular de espécies de Eimeria em amostras fecais pode ser útil para fins experimentais e de diagnóstico. No entanto, a quantidade de parasitas nas fezes e a parede do oocisto são um obstáculo nos protocolos de extração de DNA. Portanto, uma amostragem adequada e a ruptura efetiva dos oocistos são essenciais para melhorar a precisão da detecção de DNA por PCR. Os objetivos deste estudo foram avaliar seis protocolos para extração de DNA de Eimeria spp. em amostras de bovinos e ovinos. Foram distribuídos 20 grupos de amostras fecais de bovinos (10 grupos) e ovinos (10 grupos) em seis protocolos de extração de DNA: kit comercial, kit comercial com modificação, DNAzol, brometo de cetil-trimetil amônio (CTAB), pérolas de vidro e kit comercial para amostras fecais. As amostras fecais foram submetidas à extração de DNA e PCR. Entre os protocolos testados, CTAB foi considerado o mais adequado para extração de DNA de oocistos (90% de detecção de DNA por PCR); DNAzol e CTAB resultaram em maior detecção de DNA em amostras de bovinos (80%). CTAB e kit comercial com modificação melhoraram a detecção por PCR de Eimeria spp. em amostras de ovinos, amplificação positiva de DNA em todas as amostras testadas.
#6 - Pestivirus spillover effect: molecular detection of bovine viral diarrhea virus in domestic and feral pigs
Abstract in English:
Pestivirus infections are important in the livestock industries, with infection occurring in cattle, sheep and pigs. The Pestivirus genus of the family Flaviviridae, includes four recognized species: bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1), bovine viral diarrhea virus 2 (BVDV-2), border disease virus (BDV), and classical swine fever virus (CSFV). All pestivirus species can infect pigs, therefore accurate and specific pestivirus detection and differentiation is of great importance to assure control measures in swine populations. The aim of the study was the molecular detection of different pestiviruses in domestic and feral pigs. A total of 527 samples (92 pigs and 435 wild boars) were tested for pestiviruses detection using molecular assays. Eleven positive samples (6 wild boars and 5 domestic pigs) were identified using panpestivirus primers targeting the 5’- UTR region of the pestivirus RNA genome. Further all the positive samples were sequentially tested for detection of CSFV, BVDV-1 and BVDV-2 using specific primers. All RNAs were identified as positives for BVDV-1 and no amplification signals were obtained from BVDV-2 and CSFV. The current detection of BVDV-1 in clinical swine specimens highlights the important risk factor of swine population as reservoir and consequently carrier for BVDV.
Abstract in Portuguese:
As infecções por pestivírus são importantes nas indústrias pecuárias, com infecções em bovinos, ovinos e suínos. O gênero Pestivirus da família Flaviviridae inclui quatro espécies reconhecidas: vírus da diarreia viral bovina 1 (BVDV-1), vírus da diarreia viral bovina 2 (BVDV-2), vírus da doença de fronteira (VDF) e vírus da peste suína clássica (VPSC). Todas as espécies de pestivírus podem infectar porcos, portanto a detecção e diferenciação precisas e específicas de pestivírus são de grande importância para garantir medidas de controle nas populações suínas. O objetivo do estudo foi a detecção molecular de diferentes pestivírus em suínos domésticos e javali. Um total de 527 amostras (92 porcos e 435 javalis) foram testados para detecção de pestivírus usando ensaios moleculares. Onze amostras positivas (6 javalis e 5 porcos domésticos) foram identificadas usando iniciadores de panpestivírus visando a região 5’-UTR do genoma do RNA do pestivírus. Além disso, todas as amostras positivas foram testadas sequencialmente para detecção de VPSC, BVDV-1 e BVDV-2 usando iniciadores específicos. Todos os RNAs foram identificados como positivos para BVDV-1 e nenhum sinal de amplificação foi obtido do BVDV-2 e CSFV. A detecção atual do BVDV-1 em amostras clínicas de suínos destaca o importante fator de risco da população suína como reservatório e consequentemente portador do BVDV.
#7 - Microbiological and molecular detection of Mycoplasma bovis in milk samples from bovine clinical mastitis
Abstract in English:
The genus Mycoplasma includes more than 200 bacterial species that cause disease in animals. It is responsible for causing mastitis in bovines and may be related to other manifestations, such as arthritis and pneumonia in calves and heifers. The present study aimed to detect Mycoplasma bovis isolated from milk samples of bovine clinical mastitis, and to compare the isolation rates in two culture media: Hayflick and SP4. An initial screening was performed in order to detect the presence of the class Mollicutes in 1166 milk samples from clinical mastitis by the conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. According to the 1166 milk samples evaluated, 8.6% (100/1166) were positive to class Mollicutes. Regarding molecular analyses, 1.1% (13/1166) of conventional PCR for positive M. bovis was obtained and 0.9% (11/1166) in real-time PCR. The results of the microbiological culture of the 100 samples previously screened demonstrated that 6% (6/100) of colony growth have been developed when using the Hayflick medium, and 11% (11/100) when using the SP4 medium (including the positive on Hayflick medium). Concerning the 11 isolates obtained in the microbiological culture, conventional PCR confirmed M. bovis in nine of them, and two cultures were negative. In the phylogenetic analysis of the isolates, all of them were grouped in M. bovis and M. agalactiae clusters. The results confirmed the importance of the presence of M. bovis in the etiology of bovine clinical mastitis and reinforced the need for further studies to elucidate other Mycoplasma species that may be involved in bovine clinical mastitis in Brazil.
Abstract in Portuguese:
O gênero Mycoplasma inclui mais de 200 espécies que causam doenças nos animais. É responsável por quadros de mastite em bovinos, podendo também estar relacionado à outras manifestações como artrite e pneumonia em bezerros e novilhas. O presente estudo objetivou a detecção de Mycoplasma bovis isolados a partir de amostras de leite de mastite clínica bovina, bem como, a comparação da taxa de isolamento em dois meios de cultura: Hayflick e SP4. Para efeito de triagem amostral, foram avaliadas quanto à presença da classe Mollicutes 1166 amostras de leite de casos de mastite clínica pela técnica de PCR convencional. Das 1166 amostras de leite avaliadas, 8,6% (100/1166) foram positivas à classe. Nas análises moleculares, obteve-se 1,1% (13/1166) de positividade para Mycoplasma bovis na PCR convencional e 0,9% (11/1166) na PCR em tempo real. Os resultados do cultivo microbiológico das 100 amostras triadas previamente demonstraram 6% (6/100) de crescimento de colônias ao se utilizar o meio Hayflick e 11% (11/100) ao se utilizar o meio SP4 (incluindo as positivas ao primeiro). A partir dos 11 isolados obtidos no cultivo microbiológico, a PCR convencional confirmou Mycoplasma bovis em nove deles, e dois foram negativos para o agente. Na análise filogenética dos isolados, todos agruparam no cluster Mycoplasma bovis e Mycoplasma agalactiae. Frente aos resultados, ressalta-se a importância da presença de Mycoplasma bovis na etiologia da mastite clínica bovina e reforça a necessidade de estudos mais aprofundados para a elucidação de outras espécies de micoplasmas que possam estar envolvidas na mastite bovina.
#8 - Molecular detection of albinism gene in Brazilian buffalo herds (Bubalus bubalis)
Abstract in English:
Albinism is a genetic disease characterized by deficient melanin production making affected animals more susceptible to skin problems, negatively influencing production systems of the same. In buffalo, a nonsense mutation (c.1431G>A) in the tyrosinase gene was already described, which is responsible for the oculocutaneous albinism buffalo phenotype. However, prevalence studies have never been performed for this anomaly in Brazil. Therefore, the objective of this study was to investigate this mutation in buffalo herd in Brazil. Of the 315 buffalo tested with no albinism phenotype evident, 11 (3.5%) were heterozygous for the mutation and none were mutated homozygous, showing the existence of the albinism gene in buffalo production herds and proving the importance of prevalence studies for hereditary diseases in order to prevent the dissemination of these same genes and their negative productivity consequences.
Abstract in Portuguese:
O Albinismo é uma doença genética caracterizada pela deficiência na produção de melanina, o que torna os animais afetados mais susceptíveis a problemas cutâneos e influencia negativamente a criação destes animais. A mutação nonsense (c.1431G>A) no gene da tyrosinase já foi descrita como responsável pelo albinismo oculocutâneo em búfalos, entretanto estudos prévios sobre a prevalência dessa mutação ainda não foram realizados no Brasil. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a presença desta mutação em uma população de búfalos brasileiros. Foram genotipados 315 búfalos clinicamente normais, ou seja, sem o fenótipo albino evidente. Desses, 11 (3,5%) eram heterozigotos para a mutação (N/TYR) e os demais eram homozigotos selvagens (N/N). Este resultado demonstra que o alelo mutado para o albinismo em búfalo está presente no rebanho brasileiro e aponta a importância de estudos de prevalência de enfermidades hereditárias com o objetivo de prevenir a disseminação desses alelos mutados, minimizando os prejuízos.
#9 - Molecular and serological detection of Leishmania spp. in horses from an endemic area for canine visceral leishmaniasis in southeastern Brazil
Abstract in English:
This study aimed to verify the occurrence of Leishmania spp. and Leishmania (Leishmania) infantum in horses from a visceral leishmaniasis endemic area in Brazil. DNA samples from blood and conjunctival swab (CS) were tested by PCR and Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Although none of the horses was clinically sick, animals infected by Leishmania spp. were found and some could be characterized as infected by L. (L.) infantum. From 40 horses, 100% of the animals were positive by blood PCR, 90% (36/40) by CS PCR, and 2.5% (01/40) in serodiagnosis, by IFAT. Six from these 40 horses were L. (L.) infantum positive by blood PCR. Direct sequencing and analysis of amplicons resulted in a sequence to evolutionary analysis. Results indicate the presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum infecting healthy horses in Brazil. The presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum DNA in asymptomatic horses suggests that they can be important reservoirs of these parasites, a highly relevant finding for the epidemiological surveillance of the diseases they cause.
Abstract in Portuguese:
O estudo objetivou verificar a ocorrência de Leishmania spp. e Leishmania (Leishmania) infantum em cavalos de uma região endêmica para leishmaniose visceral do Brasil. Amostras de DNA de sangue e suabe conjuntival (SC) foram testadas pela PCR e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Embora nenhum cavalo estivesse clinicamente doente, animais infectados por Leishmania spp. e L. (L.) infantum foram encontrados em Ilha Solteira/SP. Dos 40 cavalos, 100% (40/40) foram positivos pela PCR de sangue, 90% (36/40) pela PCR de SC, e 2,5% (01/40) no sorodiagnóstico, pela RIFI. Seis desses 40 cavalos foram positivos para L. (L.) infantum pela PCR de sangue. O sequenciamento direto e a análise dos amplicons resultaram em uma sequência para análise evolutiva. Os resultados indicam a presença de Leishmania spp. e L. (L.) infantum infectando cavalos saudáveis no Brasil. A presença de DNA de Leishmania spp. and L. (L.) infantum em cavalos saudáveis sugere que eles podem ser importantes reservatórios desses parasitas, um achado altamente relevante para a vigilância epidemiológica das doenças que causam.
#10 - Molecular and serological detection of Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum in horses and ticks in Maranhão, Brazil, 37(12):1416-1422
Abstract in English:
ABSTRACT.- Nogueira R.M.S., Silva A.B., Sato T.P., Sá J.C., Santos A.C.G., Amorim Filho E.F., Vale T.L. & Gazêta G.S. 2017. Molecular and serological detection of Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum in horses and ticks in Maranhão, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1416-1422. Departamento de Patologia, Universidade Estadual do Maranhão, São Luis, MA 65055-970, Brazil. E-mail: grita62@hotmail.com
Equine piroplasmosis is a tick-borne disease caused by the intraeytrhocytic protozoans Babesia caballi and Theileria equi. It has been reported as a main equine parasitic disease. In addition, Anaplasma phagocytophilum, the causative agent of granulocytic ehrlichiosis, causes a seasonal disease in horses. Both diseases, can be detrimental to animal health. In this sense, blood samples and ticks were collected from 97 horses raised in the microregion of Baixada Maranhense, Maranhão State, Brazil. Serum samples were subjected to Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT) and blood samples and ticks to Polymerase Chain Reaction (PCR) to evaluate the infection by Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum. The overall seroprevalence was 38.14%, 18.55% and 11.34% for T. equi, B. caballi and A. phagocytophilum, respectively. The results of PCR from blood samples showed 13.40% and 3.09% positive samples to T. equi and B. caballi, respectively. A total of 170 tick specimens were collected and identified as Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. It was detected 2.35% (4/170) and 0.59% (1/170) positive tick samples by PCR for T. equi and B. caballi, respectively. All samples were negative to A. phagocytophilum. No statically difference (p>0.05) was observed when gender, age, use of ectoparasiticide and tick presence were analyzed. A BLASTn analysis of the sequenced samples indicated 97 to 100% similarity with T. equi 18S rRNA gene sequences in GenBank and 98 to 100% with B. caballi. Genetic analysis classified the obtained sequences as T. equi and B. caballi cluster, respectively. It can be concluded that these pathogens occur and are circulating in the studied area.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Nogueira R.M.S., Silva A.B., Sato T.P., Sá J.C., Santos A.C.G., Amorim Filho E.F., Vale T.L. & Gazêta G.S. 2017. Molecular and serological detection of Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum in horses and ticks in Maranhão, Brazil. [Detecção molecular e serológica de Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum em equinos e carrapatos no Maranhão.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1416-1422. Departamento de Patologia, Universidade Estadual do Maranhão, São Luis, MA 65055-970, Brazil. E-mail: grita62@hotmail.com
A piroplasmose equina é uma doença transmitida por carrapatos causada pelos protozoários intraeritrocitários Babesia caballi e Theileria equi. É relatada como uma doença parasitária comum em equinos. Além disso, Anaplasma phagocytophilum, o agente causal da ehrlichiose granulocítica, causa uma doença sazonal em equinos. Ambas as doenças, podem ser prejudiciais para a saúde animal. Nesse sentido, amostras de sangue e carrapatos foram coletadas de 97 cavalos criados na microrregião da Baixada Maranhense, estado do Maranhão, Brasil. As amostras de soro foram submetidas ao Teste de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e amostras de sangue e os carrapatos a Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) para avaliar a infecção por Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum. A prevalência foi de 38,14%, 18,55% e 11,34% para T. equi, B. caballi e A. phagocytophilum, respectivamente. Os resultados da PCR para as amostras de sangue demonstraram 13,40% e 3,09% de positividade para T. equi e B. caballi, respectivamente. Um total de 170 specimens de carrapatos foi coletado e foram identificados Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Obteve-se 2,35% (4/170) e 0,59% (1/170) positivos por PCR para T. equi e B. caballi, respectivamente. Todas as amostras foram negativas para A. phagocytophilum. Não houve diferença estatística significativa (p>0.05) em relação ao sexo, idade, uso de ectoparasiticida e presença de carrapatos. A análise BLASTn das amostras sequenciadas para gene 18S rRNA indicaram 97 a 100% de similaridade com T. equi e 98-100% com B. caballi no GenBank. Análises genéticas classificaram as sequencias obtidas no mesmo clado que T. equi e B. caballi, respectivamente. Podemos concluir que estes patógenos estão circulando na área de estudo.
